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蛋白質組學 | 生物樣本收集的這些小知識您都get到了嗎? (上)

分類:公司動態   發布時間 2021-04-29   閱讀: 650

組織和生物體液是用于檢測疾病和決定患者治療的重要信息來源。

通過研究正;蚣膊〗M織或者生物體液樣本的蛋白質組特征,可以詳細描述和量化與疾病狀態相關的、定義的或導致疾病發生的蛋白質差異,以闡明病理生物學、改進疾病分類或確定新的治療靶點[1,2]。

如何合理準確地收集這些樣本對于后續的檢測實驗來講,顯得尤為重要。本次小編為你傾情獻上它們的合理收集方式,為您的樣本保駕護航。

組織篇

樣品制備在蛋白質組研究中起著重要作用,被認為是組織分析中最重要的步驟之一。

組織收樣步驟

1. 首先準備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管,并且用油性記號筆在鋁箔或凍存管外表多處寫明樣本編號;

2. 每個樣本的取材部位要盡量一致,準確切除所需組織后,剔除無關的干擾組織(血管、脂肪、結締組織等);

3. 迅速用預冷的生理鹽水或預冷無酶水配制的1*PBS洗滌樣本,去除殘留血液和污染物;

4. 用無塵吸水紙快速吸干表面的液體,用滅菌的組織剪或手術刀將組織切成100mg左右小塊;

5. 液氮速凍5min,保存于-80℃;

組織樣本量要求:200mg /樣本

代謝組學

代謝組學


體液篇

體液樣本類型有:血漿和血清、尿液、腦脊液、耳屎、鼻分泌物、唾液、淚液、乳汁、支氣管肺泡液、乳頭吸液、羊水、膽汁、宮頸陰道液和精漿等[4]。體液樣本類型較多,本篇重點介紹最常見的前四種體液樣本收集方法,更多的需求可向小篇索要文獻進行詳細研究。

1
血漿收樣步驟

1. 建議使用紫色EDTA抗凝管采集血液;
2. 輕輕地上下顛倒混勻 8-10 次,立即將全血置于4℃或冰盒中正立放置;
3. 4℃,≤1300g(1200g或者1000g)離心10 min,取上清(血樣需要在在1小時內進行血漿分離,依據抗凝管操作說明或者客戶實驗室血漿分離步驟進行操作);
4. 用移液器將上清(血漿)轉移到離心管中分裝,【如果樣本量體積較大,建議分裝保存(每管分裝200~300ul)】,可加入蛋白酶抑制劑(非必須);
5. 液氮速凍5min,保存于-80℃。

代謝組學

血清樣本量要求:200ul/樣本

2
血清收樣步驟

1. 使用真空采血管收集血液;
2. 輕輕地上下顛倒混勻5-6 次;
3. 4℃,靜置30~60min,讓全血凝集;
4. 4℃,≤1300g(1200g或者1000g)離心10min,立即取上清; 
5. 用移液器將上層淡黃色血清轉移到離心管中(如果樣本量體積較大, 建議分裝保存(每管分裝200~300ul)),可加入蛋白酶抑制劑(非必須);
6. 液氮速凍5min,保存于-80℃。

代謝組學

血清樣本量要求:200ul/樣本

代謝組學

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3
尿液收樣步驟


1. 收集中段晨尿;

2. 5,000g,4℃離心30min,去除細胞及碎片;

3. 用移液器取上清轉移至進口的離子管,轉移至-80℃的冰箱凍存。


尿液樣本量要求:15ml/sample

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4
腦脊液收樣步驟

1. 2000×g 離心5 min,(或使用0.22μm 濾膜過濾),取上清;
2. 液氮速凍5 min,保存于-80℃。

腦脊液樣本量要求:2ml/sample

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友情提示:以上樣本量需求僅針對的是常規蛋白組學實驗,如:TMT、Label Free ,DIA等,若需要做修飾蛋白組學,則需要增加3~10倍不等的用量。

百趣生物已檢測樣本類型

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參考文獻:
[1] Dapic Irena,Baljeu-Neuman Lucia,Uwugiaren Naomi et al. Proteome analysis of tissues by mass spectrometry.[J]. Mass Spectrom Rev, 2019, 38: 403-441.
[2] Gillette Michael A,Carr Steven A,Quantitative analysis of peptides and proteins in biomedicine by targeted mass spectrometry.[J].Nat Methods, 2013, 10: 28-34.
[3] Shabihkhani Maryam,Lucey Gregory M,Wei Bowen et al. The procurement, storage, and quality assurance of frozen blood and tissue biospecimens in pathology, biorepository, and biobank settings.[J].Clin Biochem, 2014, 47: 258-66.

[4] Lygirou Vasiliki ,Makridakis Manousos, Vlahou Antonia, Biological sample collection for clinical proteomics: existing  SOPs.[J].Methods Mol Biol, 2015, 1243: 3-27.

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